限于专利技术保护的原因,目前全球兔单克隆杂交瘤细胞制备技术被一家公司垄断,所以我们无法通过像类似制备小鼠单克隆抗体那样,制备兔源杂交瘤细胞获得兔源单克隆抗体。为此,公司在一大批免疫学与基因工程学专家的帮助下,先后建立了两套兔源单克隆抗体制备方案。这两种方案均不依赖于兔源骨髓瘤细胞,但是其抗体的种源特性毫无疑问是兔源,在保留兔源单克隆抗体优势的同时,大大压缩试验周期,提高试验成功率。
服务组合
服务项目
(Service Items)
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周期(周)
Time(weeks)
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方案一:
噬菌体展示技术
(phage Display)
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方案二:
异源表达重组技术
(Heterogeneous Recombination)
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多肽peptide
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小分子
Molecular
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磷酸基/甲基/
乙基化多肽
Phosphate/Methyl/
acetyl-specific
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目前只有针对部分肿瘤相关通路热点分子的抗原,详情请与公司技术人员沟通
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多肽设计与合成
Peptide design &
synthesis
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多肽设计
Peptide design
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~2
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可选,免费
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多肽合成
Peptide
synthesis
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小分子或多肽偶联
conjugation
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免疫阶段
Immunization
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免疫2只兔子
Immunized 2 rabbits
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~8
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ELISA检测
Elisa detection
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cDNA制备
cDNA preparation
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逆转录制备cDNA文库
prepare cDNA liberary by RT-PCR
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~1
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cDNA文库质检
cDNA liberary QC check
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构建Fab抗体库
Fab liberary construction
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VH与VL基因获得
obtained VHand
VLgenes
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10~15
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构建初级抗体库
primary antibody liberary
construction
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构建Fab抗体库
Fab liberary construction
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噬菌体筛选
phage screening
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噬菌体颗粒包装
phage particles package
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10~15
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磁珠亲和筛选
magnetic beeds affinity
screening
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阳性克隆回收基因测序
Recover positive clones and DNA sequencing
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抗体表达
Antibody expression
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特异性双链基因合成与Fc基因桥接
synthetic of target phage gene and
Fc gene
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~5
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构建真核表达载体
Eukaryotic system expression plasmids construction
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真核表达
Eukaryotic system expression
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稳转细胞系构建
Stably transfected cell line construction
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纯化与检测
Purification and detection
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标签纯化
Lable tag
affinity purification
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~1
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特异性亲和纯化
Antigen specific affinity
purification
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总周期(月)
Total lead time(months)
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7~9
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3~5
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注:
1) 价格面议;
2) 请慎重考虑周期事宜,以上时间仅为理想条件下最短周期;
3) 为了缩短试验周期建议考虑自行提供抗原直接免疫做起;
4) 免疫环节设立第一各验收节点,效价合格,取脾脏,效价不合格,终止实验;
5) 抗体库构建步骤启动之前,至少支付此步骤的50%全款;完成项目,支付尾款。
经典案例(Rabbit Monoclonal Recombination Antibody Service)
客户:提供抗原蛋白信息
制备流程:
1)抗原制备\质粒表达蛋白纯化\多肽设计合成及交联
2)免疫仓鼠:首次免疫兔子2只,失败后又加免了3只
3)ELISA/Western-blot试验监控小鼠血清中的抗体效价和特异性,根据ELISA和WB检测,筛选兔子
4)cDNA文库制备与噬菌体载体构建
5)磁珠链霉素亲和筛选
6)阳性克隆测序与基因合成桥接
7)真核表达质粒构建
8)稳转细胞构建
9)试表达鉴定与结果交付
交付产品(每种抗原、5只仓鼠一共的)
1)1株针对免疫原特异性的单克隆杂交瘤细胞株
2)1ml(浓度约0.1~1mg/ml)纯化的抗体,Elisa效价应至少1:200以上;制备时间:3~6个月
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