全部产品分类
服务号： |
ABF4001 | 目录价： |
￥9500.00 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
服务周期： |
7-10周 | 服务分类： |
酵母系统蛋白表达纯化 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
毕赤酵母表达系统介绍毕赤酵母（Pichia pastoris）表达系统是近年来发展迅速、应用广泛的一种真核表达系统。它是甲醇营养型酵母菌，有两个乙醇氧化酶（Alcohol oxidase, AOX）编码基因AOX1和AOX2，两种序列相似，AOX1基因严格受甲醇诱导和调控。当甲醇为唯一碳源时，AOX1启动子可被甲醇诱导，启动乙醇氧化酶的表达，从而用甲醇进行代谢，含AOX1启动子的质粒可用来促进编码外源蛋白的目的基因的表达。 表达菌株特点GS115：AOX1和AOX2基因都正常表达AOX蛋白（乙醇氧化酶），甲醇的利用率高，接近于野生型，属于甲醇快速利用型（Mut+） KM71：AOX1基因被大部分剔除，只能利用AOX2为AOX编码，甲醇的利用速率变慢，表现为甲醇慢利用型（Muts） 外源基因的整合方式不同会导致表达菌株的表型不同： 菌株表型
常用表达载体及筛选标记载体信息
信号肽对于胞外表达的蛋白除了可以用载体自带的信号肽，还有以下信号肽可供选择： 信号肽序列
毕赤酵母表达系统的优势1. 含有特有的强有力的AOX（醇氧化酶基因）启动子，用甲醇可严格地调控外源基因的表达。 2. 培养成本低，产物易分离，毕赤酵母所用发酵培养基成本合理，一般碳源为甘油或葡萄糖及甲醇，其余为无机盐，培养基中不含蛋白，有利于下游产品分离纯化。 3. 外源蛋白基因遗传稳定，外源基因能以高拷贝数整合到毕赤酵母基因组中，不易丢失并能得到高表达菌株。 4. 作为真核表达系统，毕赤酵母具有真核生物的亚细胞结构，具有糖基化、脂肪酰化、蛋白磷酸化等翻译后修饰加工功能。 艾柏森生物酵母表达系统的优势1. 具备完备的毕赤酵母表达平台，可以根据蛋白特性或客户的需求设计不同的实验方案； 2. 具有高通量的筛选平台，可以快速有效的得到最佳表达条件； 3. 具有大规模发酵生产能力 服务组合
服务列表
酵母表达系统表达蛋白
服务项目名称
服务编号
酵母表达系统-(zeocin加压套餐)
ABF4001-2
步骤
服务内容
服务描述
价格
周期
1
密码子优化，基因合成
针对蛋白信息，技术人员进行结构预测分析，风险评估，方案制作；采用三密码子或多样三密码子规则，优化密码子序列，验证蛋白的序列氨基酸种类和比例，并进行基因合成，避免移码突变。
1.50/bp
2~3周
2
亚克隆
利用PCR、胶回收、等技术手段将目的蛋白的基因导入适合载体中，构建稳定质粒
500
3~5天
3
梯度加压筛选（zeocin）
保证细胞培养的条件合适的前提下（如培养基选用适当，营养成分的适量，培养液新鲜等条件），使细胞正常的生长和存活，逐渐增加zeocin浓度，每一次等细胞适应这个压力并恢复正常生长后，再继续加压；筛选出最适zeocin浓度
2500
1周
4
表达小试阶段
挑2个克隆摇瓶,优化表达条件（甲醇浓度和诱导时间梯度优化）
1500
1~2周
5
纯化测试
最优克隆+最优表达条件100ml表达纯化，小量表达测试蛋白质量以及条件是否达标；可交付蛋白样品
1500
1~2周
6
1L发酵纯化
依据加压筛选、纯化测试、表达小试中的条件表达蛋白
3500
2~3周
7
干冰运输样品
免费运输
0
8
实验报告
根据顾客需求提供全程实验报告（可包括表达时检测的SDS-PAGE以及其他质控指标）
0
合计
9500（不含基因合成）
7~10周
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