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FRET技术 | |
荧光能量共振转移(Fluorescence resonance energy transfer, FRET) 是检测活体中生物大分子纳米级距离和纳米级距离变化的有力工具,在生物大分子相互作用分析、细胞生理研究、免疫分析等方面有着广泛的应用。如检测细胞内酶切作用、检测细胞内钙浓度变化、蛋白质磷酸化、蛋白质间相互作用、离子通道构形变化、受体激活等。
荧光能量共振转移是距离很近的两个荧光分子间产生的一种能量转移现象。当供体荧光分子的发射光谱与受体荧光分子的吸收光谱重叠,并且两个分子的距离在10nm范围以内时,就会发生一种非放射性的能量转移,即FRET现象,使得供体的荧光强度比它单独存在时要低的多(荧光猝灭),而受体发射的荧光却大大增强(敏化荧光)。
FRET主要可分为分子内FRET和分子间FRET: 前者指在一个分子上标记两个探针,检测这个分子自身发生的一些变化;后者指在不同的两个分子上分别标记供体和受体探针,检测这两个分子间的相互作用。分子内FRET更稳定。
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