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ABF2100 | 目录价: |
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慢病毒转染稳转细胞系构建 | |
慢病毒构建并包装后,以进行贴壁细胞或悬浮细胞的转染。具体流程如下: 1. 对慢病毒基因进行改造,即敲除U3端的400bp的特定基因,使其逆转录和整合的能力,但保留产生病毒颗粒必须的蛋白的能力。 2. 向上述基因中插入目的基因。与具有包装功能的质粒同时进行对包装细胞的转染。在细胞上清中获得携带目的基因的复制缺陷型慢病毒载体颗粒。 3. 使用上述获得的慢病毒颗粒转染目的细胞。 4. 根据慢病毒携带的标记基因,转染得到的细胞进行荧光蛋白检测或加入抗生素进行细胞筛选。 5. 荧光性强或者克隆数多的细胞系加以传代培养并保存。
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