1. 乙醇预处理
添加乙醇到每个孔中,接触乙醇后,膜立刻变成灰色,表明PVDF被激活了。如果同时包被几块板,建议一次处理1-2块板,马上进入下一步。
乙醇浓度和处理时间非常关键:
MSIP和IPFL板--添加15µl 35%乙醇到每个孔中,乙醇在每个孔中停留时间不要超过1分钟。
MAIPSWU 板--添加50µl 70%乙醇到每孔中,乙醇在每个孔中停留时间不要超过2分钟。
2. 无菌水清洗
清空板子,用无菌水清洗5次200 µl/well。如果使用MSIP或IPFL板,可不用清空板子直接把水添加到孔中。
3. 加入包被抗体
清空板子,添加PBS稀释抗体100µl/well,一般推荐浓度10-15µg/ml(1-1.5µg抗体/well), 4℃过夜。